Cuoco inició su carrera con 7 años (1992) en Quicksand: No escape, junto a Donald Sutherland y Tim Matheson.
Su rol de Maureen McCormic en Growing up Brandy (1999) captó mucho la atención, al igual que en la serie Ladies man y una aparición corta en un juego de Comedy Central: Don't forget your toothbrush.
En 2004, además de su papel en 8 Simple Rules for Dating My Teenage Daughter, protagonizó unas series de la cadena NBC y algunas películas de la ABC.
Le dio voz al personaje de Brandy en la serie animada Brandy and Mr. Whiskers entre 2004 y 2006 y ese mismo año fue sorprendida en el programa Punk'd (MTV), presentado por Ashton Kutcher. Además, participó en un capítulo de la serie Chosen ones como la malvada bruja Carol Stael.
En la octava y última temporada de la serie Charmed interpretó a Billie Jenkins, una joven bruja aprendiz de las hermanas Phoebe Halliwell (Alyssa Milano), Piper Halliwell (Holly Marie Combs) y de Paige Matthews (Rose McGowan).
En 2007 protagonizó su primera película: To Be Fat Like Me, donde interpreta a una joven atleta que no entiende el sobrepeso. Por esta razón, ella se viste de gorda y graba todo para un documental el cual hace para ganar dinero e irse a la universidad. El 8 de noviembre de ese mismo año se estrenó The Big Bang Theory, serie donde interpreta a la camarera y aspirante a actriz Penny. El personaje, vecina de los físicos Sheldon Cooper y Leonard Hofstadter, cambia radicalmente la vida de estos debido al interés amoroso que despierta en Leonard.
Ha aparecido en dos episodios de Prison Break, exactamente en The Message y Chicago, además de en la serie televisiva Hope & faith.
En 2011 protagoniza, junto a James Marsden la película Hop, dirigida por Tim Hill.
En 2011 fue la anfitriona de los Teen Choice Awards 2011.
Aquí unas imágenes para su deleite:
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